En 1867 se publicaron reglas nuevas y enmendadas -incluidas las medidas que dictaban la duración de los asaltos- bajo el patrocinio del Marqués de Queensberry. Esta es una de las fechas más importantes en la historia del boxeo; el punto en el que el boxeo moderno comenzó su largo y exitoso camino.
Las reglas fueron redactadas por el deportista galés John Chambers, que compitió en boxeo, remo, ciclismo, atletismo, billar, lucha libre y atletismo. Chambers se encargó de codificar las nuevas reglas que se nombrarían en honor a John Sholto Douglas - el 9º Marqués de Queensberry, un noble escocés que apoyó la campaña de lanzamiento del boxeo moderno.
Las reglas especificaban que el tamaño del cuadrilátero debía ser de 24 pies (7.32 m), y que el tiempo de los asaltos debía ser de tres minutos con intervalos de un minuto de descanso entre ellos. Se prohibieron los agarres propios de lucha libre durante los combates y, en caso de derribo, se daba a los boxeadores una cuenta de 10 segundos como tiempo de recuperación. Una de las principales consecuencias de las nuevas normas era que los combates se alargaban, lo que daba lugar a enfoques más estratégicos y tácticos.
No se permitía agarrar, sujetar o abrazar, y no se permitían "segundos" ni ninguna otra persona en el ring durante los asaltos. Los combates sólo debían ser detenidos por cualquier interferencia inevitable. Sólo se permitían guantes de boxeo nuevos y de mayor calidad de un tamaño fijo en los combates. Un boxeador con una rodilla sobre el suelo se considera "caído" y no se permitían zapatos o botas con ningún tipo de resortes.
En 1867 se celebró un Campeonato de Boxeo Amateur en Lillie Bridge, Londres, basado en las nuevas Reglas del Marqués de Queensberry con torneos de peso ligero, medio y pesado en el programa oficial. La gran mayoría de las reglas usadas ese día se siguen usando hoy en día.
El primer campeón bajo las Reglas del Marqués de Queensberry fue un americano de ascendencia irlandesa llamado "Gentleman Jim" Corbett, que triunfó sobre el legendario John Sullivan con un paro en la 21ª ronda en Nueva Orleans, Estados Unidos en 1892. Corbett perdió entonces su título en 1897 cuando el británico Bob Fitzsimmons lo noqueó en el 14º asalto.
El boxeo siguió extendiéndose por los continentes europeo y americano en las últimas etapas del siglo XIX y muchos países organizaron eventos oficiales en las décadas de 1880 y 1890. Atenas acogió los primeros Juegos Olímpicos modernos en 1896, mientras que la capital francesa, París, fue la sede de la segunda edición en 1900. Para la tercera - los Juegos de San Luis de 1904-, el boxeo se había añadido al programa olímpico oficial.